多糖多酚植物總 RNA 提取試劑盒（gDNA 過(guò)濾器）

Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit

多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91318

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個(gè)月，不影響使用效果。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

適用于快速提取各種植物根、莖、葉、花的總RNA，采用gDNA過(guò)濾器，高效濾除gDNA，得到的總RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE等。

成功案例：棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報(bào)春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋(píng)果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻、慈姑、葛根、甘肅桃、玫瑰花、檳榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡楊、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、紅樹(shù)根、鐵線蕨、黃瓜、小麥、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、馬尾松、蕪菁、毛果楊、木薯、大葉落地生根、山杏、旱柳、桉樹(shù)、琵琶花果、麻風(fēng)樹(shù)，沙生槐、蕎麥...

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無(wú)毒：免lv仿、免β-巰基乙chun！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過(guò)程僅需 20min！

操作步驟

第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液 RW 中加入zhi定量無(wú)水乙chun，詳見(jiàn)瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行。

1. 材料處理：

a．吸取 500 μl 裂解液 PRL，轉(zhuǎn)入 1.5 ml 離心管中，再加入50 μl糖酚去除劑PAD，混勻備用。

注意：糖酚去除劑 PAD 是提取多糖、多酚、次級(jí)代謝產(chǎn)物多、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分。對(duì)于幼嫩的農(nóng)作物葉片等簡(jiǎn)單樣本，不加糖酚去除劑 PAD，RNA 的產(chǎn)量可能會(huì)提高一些。

b．液氮中研磨植物組織成細(xì)粉，取≤50 mg 細(xì)粉轉(zhuǎn)入上述裝有 PRL 裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻。

冬天氣溫低， 37℃搖床放置 3 min，可增強(qiáng)裂解效果，提高產(chǎn)量

c．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用 1ml 裂解液 PRL 和 100 μl 糖酚去除劑去裂解 100 mg 樣品，RNA 產(chǎn)量會(huì)翻倍。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉(zhuǎn)入一個(gè)新的 1.5 ml離心管，加入0.5倍體積（一般 240 μl）的無(wú)水乙chun, 吹打混勻。

3. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過(guò)濾器中，13,000 rpm 離心2 min，倒棄濾液。此時(shí)，絕大部分gDNA 被濾除，RNA 和少量 gDNA殘留被吸附在膜上，重復(fù)此過(guò)程，直到混合液全部轉(zhuǎn)入gDNA 過(guò)濾器。

4. 取出步驟3的gDNA 過(guò)濾器，放入一個(gè)新的 2 ml 離心管中，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 離心1 min，收集濾液（RNA 在濾液中），向?yàn)V液中加入 250μl 無(wú)水乙chun，吹打混勻。

5. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，此時(shí)，RNA被吸附在膜上，倒棄濾液。

6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 重復(fù)步驟 7。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加30~50μl的RNase-free H₂O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

11. 提取的總RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

附錄：

一、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 鋼珠 3 粒，放進(jìn)≤50 mg 樣本，投入液氮中預(yù)冷。把研磨模塊也丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。

b. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率，震蕩 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 為例）

c. 研磨完成后，馬上加 500μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖分去除劑 PAD，劇烈渦旋30 sec。

d. 將裂解物13,000 rpm 離心5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入5 mm 鋼珠1粒，加1ml裂解液 PRL和100μl PAD，放進(jìn)≤100 mg 樣本，設(shè)置 60 個(gè)頻率，震蕩 2 min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒