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抗壞血酸氧化酶活性測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨
簡(jiǎn)要描述:

AAO 是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白,屬“藍(lán)銅氧化酶"家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO 與細(xì)胞壁的代謝和生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系。
抗壞血酸氧化酶活性測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨

  • 產(chǎn)品型號(hào):BW6006
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2025-07-18
  • 訪  問  量:156
詳情介紹


抗壞血酸氧化酶(ascorbate oxidase,AAO活性測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

AAO 是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白,屬“藍(lán)銅氧化酶"家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO 與細(xì)胞壁的代謝和生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b 還原,該過程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

測(cè)定原理:

AAO 可直接氧化AsA,通過測(cè)定AsA 的氧化量,可計(jì)算得 AAO 活力。

抗壞血酸氧化酶活性測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨

組成:

產(chǎn)品名稱

BW6006-100T/96S

Storage

試劑一:液體

100ml

4℃

試劑二:液體

20ml

4℃

試劑三:粉劑

1

4℃

說明書

一份

 

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 2ml 蒸餾水充分溶解。

自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml) 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測(cè)。

AAO 測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 265 nm。

2. 試劑二在 25℃水浴鍋中預(yù)熱 30 min

3. 依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μl 上清液、170μl 預(yù)熱的試劑二和 10μl 試劑三,迅速混勻后在265nm 測(cè)定 10s  130s 光吸收A1 A2,△A =A1-A2。

AAO 活性計(jì)算公式:

a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

AAO 活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol AsA  1 個(gè)酶活單位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反總×109÷(Cpr×V )÷T

= 92.4×△A÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

AAO 活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘氧化 1nmol AsA  1 個(gè)酶活單位。

AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d)×V 反總×109÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

= 92.4×△A÷W

ε:AsA  265nm 處摩爾吸光系數(shù)為 5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光徑(cm),1 cm; V 反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μl=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測(cè)定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積

(ml),20μl=0.02 ml;V 樣總:提取液體積,1ml T:催化反應(yīng)時(shí)間(min),2min。

b. 使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

AAO 活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol AsA  1 個(gè)酶活單位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反總×109÷(Cpr×V )÷T

=184.8×△A÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

AAO 活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘氧化 1nmol AsA  1 個(gè)酶活單位。

AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d)×V 反總×109÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

= 184.8×△A÷W

ε:AsA  265nm 處摩爾吸光系數(shù)為 5.42×104 L/mol/cm;d:96 孔板光徑(cm),0.5 cm V 反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μl=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/ml),需要另外測(cè)定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(ml),20μl=0.02 ml;V 樣總:提取液體積,1 ml;

T:催化反應(yīng)時(shí)間(min),2min。

注意事項(xiàng):

配制好的試劑放在 4℃保存,三天內(nèi)使用完。

抗壞血酸氧化酶活性測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨


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