FlashPure Blood Genomic DNA Kit

血液基因組 DNA ti取試劑盒

（離心柱型）

小量全血基因組DNA快速 ti取試ji盒核酸提取

目錄號(hào):40110

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

無水乙chun，RNase A（可選）

保存條件：

室溫（15~25℃）

蛋白mei K，室溫可保存 6 個(gè)月，4℃保存 12 個(gè)月，~ 20℃保存 2 年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn) 

產(chǎn)品簡介：

適用于從新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA，也可以提取白膜層和血凝塊。

本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需fenlv仿等有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的chun類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸mei污染，可直接進(jìn)行PCR、mei切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：  

1.         簡便快速：30 min 內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA。

2.         安全無毒：無需苯fen/lv仿抽提。

3.         高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量 200µl 全血可提取出 3～6µg 基因組 DNA，

4.         高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達(dá) 30～50 kb，可直接進(jìn)行 PCR、mei切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1.         如果結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

2.         開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 為了最jiaxiao果，最hao使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

4. 不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大。

5.         洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游mei切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫

（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能下游mei切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋

操作步驟：

第一次使用前，請先在漂洗液 WB 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶身的標(biāo)簽。提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1.         柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）

2. 取 200 μl 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入 1.5 ml 離心管。

如果血液起始量小于200 μl，則用1× PBS補(bǔ)足到200 μl。

如果起始量介于200μl-300μl之間，則需要按照比例增加試劑用量。

如果起始量介于300 μl~1 ml之間，則需要先進(jìn)行紅細(xì)胞裂解操作: 將 10x 紅細(xì)胞裂解液用滅菌水稀釋到1x，然后在樣品中加入3倍體積的1x紅細(xì)胞裂解液，顛倒混勻，室溫放置10 min，期間再顛倒混勻幾次。 13,000 rpm離心20 sec(對(duì)于1.5 ml離心管)或2,000 ~ 3,000 rpm離心5 min(對(duì)于15 ml離心管)，吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀（如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，則再次加入3倍1x紅細(xì)胞裂解液，重復(fù)裂解一次），加入200 μl 1× PBS，振蕩至che底懸浮。

提取凝固血時(shí)需要在操作前用槍頭搗碎血凝塊后按照正常步驟進(jìn)行。

如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量僅用5 ~ 20 μl，可加1× PBS 補(bǔ)足到200 μl后，進(jìn)行下面的裂解步驟。

3.       （可選，一般不需要）如果需要去除 RNA，可向 200 μl 的血液樣品中加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫放置 5 ~ 10 min。

4.        加入 20 μl 蛋白meiK 溶液，充分振蕩混勻。

5.       加入 200 μl 結(jié)合液 CB，充分振蕩混勻，70℃放置 10 min，期間顛倒混勻幾次，溶液應(yīng)該變清亮，但顏色偏黑。（如果未變清亮，請延長時(shí)間）

6.       冷卻后加 100 μl 無水乙chun (或異丙chun)，充分振蕩混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

7.       將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè)DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）

13, 000 rpm 離心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。

8.        加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9.        加入 600 μl 漂洗液 WB（請檢查是否已加入無水乙chun），13, 000 rpm

離心 30 sec，倒棄濾液。

10.     重復(fù)步驟 9 一遍。

11.     將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

12.     取出 DNA 吸附柱，放入一個(gè)干凈的 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央加入 100 μl 洗脫緩沖液 EB （洗脫緩沖液事先在 80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量）， 室溫放置 3 ~ 5 min，13, 000 rpm 離心 1 min。

可將第一次洗脫所得的 DNA 溶液重新加入離心柱中，室溫放置 2 min， 13, 000 rpm 離心 1 min?？梢蕴岣邼舛?span> 10%左右。

13.     DNA 可以存放在 2~8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在-20℃。

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