維生素E（Vitamin E，VE）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性wei生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中最主要的抗氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價值。

測定原理：

VE 還原Fe³⁺為Fe²⁺，Fe²⁺與 1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在 530nm 有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、漩渦震蕩儀。

NADH，進(jìn)一步采用 MTT 還原法檢測。

維生素E試劑盒-常備現(xiàn)貨

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、漩渦震蕩儀。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

樣本處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，勻漿后用提取液定至 1ml，定至在漩渦混勻儀上震蕩 5min，于 25℃，5000g 離心 10min，取上層測定。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）后在漩渦混勻儀上震蕩 5min，于 25℃，5000g 離心 10min，取上層測定。

3. 血清：取 0.1ml，加 0.9ml 提取液，漩渦儀混勻上震蕩 5min，于 25℃，5000g 離心 10min，取上層測定。

測定操作：

計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.22x + 0.0065 R² = 0.9978

1. 按照蛋白含量計算

VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷（V 樣×Cpr）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

VE 含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算

VE 含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 9.09×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

VE 含量（μg/ml）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反總÷V 樣×10

= 90.9×（△A -0.0065）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：加入樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.11x + 0.0065 R² = 0.9978

1. 按照蛋白含量計算

VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V 反總÷（V 樣×Cpr）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

VE 含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算

VE 含量（μg/10⁴ cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）

= 18.18×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

VE 含量（μg/ml）=（△A -0.0065）÷0.11×V 反總÷V 樣×10

= 181.8×（△A -0.0065）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：加入樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專⒃谟嬎愎街谐艘韵♂尡稊?shù)。

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