原果膠含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/48S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用，在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。

測(cè)定原理：

原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物，在 530 nm 處有特征吸收峰。

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試劑的組成和配制：

自備儀器和用品：

天平、研缽、常溫離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、濃硫酸和蒸餾水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

樣品處理：

將組織樣品搗碎，按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(ml)為 1: 20 的比列（建議取約 0.05g 樣品，加入 1ml 提取液一），置于 90℃恒溫水浴鍋中浸提 30min，取出冷卻后于 5000g、 25℃離心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1ml 提取液一重復(fù)操作一次，離心后去上清，沉淀中加入 1ml 提取液二，置于 90℃恒溫水 浴鍋中水解 1h，取出冷卻后于 8000g、25℃離心 15min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定操作表：

計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V 樣總) = 0.25×△A2÷△A1÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/ml；V 標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02ml； V 樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本鮮重，g。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V 標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V 樣總) =0.25×△A2÷△A1÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/ml；V 標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02ml； V 樣總：加入提取液體積，1ml； W：樣本鮮重，g。

注意事項(xiàng)：

1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

2、濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，90℃加熱取出后冷卻再打開(kāi)蓋子，以防液體飛濺燒傷。

3、若吸光值超過(guò) 1，可將樣本提取液進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

4、zui低檢出限為 10μg/g。

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