土壤中性木聚糖酶(Soil Neutral Xylanase,S-NEX)測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/24 樣
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱(chēng)為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中,NEX 一般分離自最適生長(zhǎng)pH 為 6-8 的微生物。
NEX 在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),在 540nm 處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在 540nm 吸光值增加速率,可計(jì)算NEX 活力。
產(chǎn)品名稱(chēng) | BO6090-50T/24S | Storage |
緩沖液:液體 | 20ml | 4℃ |
試劑一:液體 | 5ml | 4℃避光 |
試劑二:液體 | 25ml | 4℃避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
樣品處理:
新鮮土樣風(fēng)干,過(guò) 30-50 目篩。
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
土樣(g) | 0.1 | 0.1 |
緩沖液(μl) | 600 | 400 |
試劑一(μl) | 200 | |
混勻,50℃震蕩反應(yīng) 30min,立即 90℃水浴 10min,8000g,25℃離心 10min,取上清 500μl | ||
試劑二(μl) | 500 | 500 |
混勻,90℃水浴中顯色 5min,蒸餾水調(diào)零,1ml 玻璃比色皿測(cè)定 540nm 處吸光值A, |
S-NEX 計(jì)算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 1.6904x + 0.0058,R2 = 0.9989
酶活定義:50℃,pH6.0 條件下,每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
S-NEX 活力(μmol/d/g 土樣)=(△A -0.0058)÷ 1.6904×V 反總×103÷ W÷T÷ 150
= 113.58×(△A -0.0058)÷ W
V 反總:反應(yīng)總體積,0.6ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150:木糖分子量。
1. 保證震蕩反應(yīng) 30min,使酶與底物充分接觸。
2. 注意 90℃水浴防止爆開(kāi),以免改變反應(yīng)體系。
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