土壤谷an酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動物和某些細菌以及植物根中，催化谷an酰胺水解成谷an酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。

測定原理：

S-GLS 催化谷an酰胺水解成 L-谷an酸和氨，利用奈氏試劑檢測氨增加的速率，即可計算其酶活性。

土壤谷an酰胺酶活性測定試劑盒-常備現(xiàn)貨

試劑組成和配制：

自備儀器和用品：

臺式離心機、可見分光光度計、1ml 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、甲苯、冰和雙蒸水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 420nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣品測定（在 EP 管中加入下列試劑）；

振蕩混勻，室溫放置 15min；

混勻，37℃水浴 2 小時

混勻，8000 g，25℃離心 10 min；取上清液，依次加入下列試劑

注意事項:

混勻，室溫靜置 15min，420nm 處讀取測定管和對照管吸光值，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。

試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。

酶活性計算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 3.8488x +0.0057；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值A。單位定義：每 g 土樣每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

S-GLS（nmol/min/g 土樣）=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總÷W÷T×1000

=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。

V 反總：反應(yīng)體系總體積：1.05ml；T：反應(yīng)時間，2h=120min；W：樣本質(zhì)量，g; 1000，μmol 到nmol換算系數(shù)。

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