本試劑盒可在室溫(22°C) 10分鐘條件下，迅速完成DNA 片段粘端或平端連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化?？捎糜贒NA 片段克隆，文庫(kù)構(gòu)建，TA克隆，Linker連接等。
DNA Quick Ligation Kit T4原理載體及其他

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DNA Quick Ligation Kit

DNA Quick Ligation Kit T4原理載體及其他

目錄號(hào)：42110

產(chǎn)品儲(chǔ)存：-20°C 保存，避免反復(fù)凍融次數(shù)過(guò)多。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

制品說(shuō)明：本試劑盒可在室溫(22°C) 10分鐘條件下，迅速完成DNA 片段粘端或平端連接反應(yīng)。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化?？捎糜贒NA 片段克隆，文庫(kù)構(gòu)建，TA克隆，Linker連接等。

特點(diǎn)：快速、簡(jiǎn)單、粘端平端均可以在10分鐘內(nèi)完成連接反應(yīng)。

操作步驟：

1. 反應(yīng)按以下體系進(jìn)行：

5 ml	2 xQuick Ligation Buffer
ml	Vector DNA(30-60ng）
ml	Insert DNA（載體摩爾數(shù)量的3倍量，插入和載體摩爾比為3:1）
ml	無(wú)菌水
1 ml（5 Weiss Units/ml)	T4 DNA Ligase
Final Volume	10ml

一般最后加入T4 DNA Ligase，充分混勻，可瞬間離心收集液體至管底。

2. 22°C連接10分鐘（一般可在PCR儀器完成）。

通常推薦22°C連接5-10分鐘，>3kb長(zhǎng)片段連接可以延長(zhǎng)至30分鐘。不推薦超過(guò)30分鐘，超過(guò)可能降低轉(zhuǎn)化子數(shù)量。

3. 冰上冷卻，然后直接轉(zhuǎn)化或貯存于-20°C

如儲(chǔ)存于-20°C，轉(zhuǎn)化前應(yīng)該置冰上重新溶解，充分混勻后進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

說(shuō)明：

1. 轉(zhuǎn)化前不要熱滅活T4 DNA ligase，否則將降低轉(zhuǎn)化效率。

2. DNA片段體積大于4 ml的，可增加2 xQuick Ligation Buffer，總反應(yīng)體積相應(yīng)可以增至20 ml，這樣在連接體系中可加入更大體積的DNA片段。

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