Script IV RT MasterMix

( Perfect for qPCR )

Script IV RT MasterMix 反轉(zhuǎn)錄試劑

目錄號(hào):71618

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 12 個(gè)月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Script IV RT MasterMix采用第四代高達(dá)60℃的全新高溫逆轉(zhuǎn)錄酶，可以通讀GC含量豐富，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板，極大提高了逆轉(zhuǎn)錄效率，CT值一般提早2-3個(gè)循環(huán)。

5x RT Mix IV為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），并且，針對(duì)qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化oligodT和N6隨機(jī)引物配比，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率，zui大程度保證了qPCR結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性。

適用范圍

第一鏈cDNA合成，尤其高GC含量，復(fù)雜模板的cDNA合成。可用于高拷貝、低拷貝基因的檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1． 避免RNase污染。

2． 為保證反轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的RNA樣品。

3． 5x RT Mix IV含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導(dǎo)致?lián)p失， 使用前請(qǐng)點(diǎn)甩離心后取用。 5x RT Mix IV包含的酶過量，即使每次分別按照3.8 μl使用，也不影響使用效果。

4． 20 μl逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達(dá)量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否則，RNA量過高，可能會(huì)超出后續(xù)qPCR的線性范圍。

5． 本產(chǎn)品適用于包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。

6． 如果模板具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉(zhuǎn)移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻，50°C孵育15 min進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

重要提示：操作前，請(qǐng)將各組分輕彈混勻，點(diǎn)甩離心后置冰上備用。

1． 反應(yīng)體系的配制

于冰上，在PCR管中，加入以下組分：

2． 輕柔吸打混勻，50℃孵育15 min，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

3． 85°C加熱5 sec，終止反應(yīng)。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用；長(zhǎng)期存放，請(qǐng)分裝后存于-70°C。

qPCR

建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。

如果基因表達(dá)量比較高，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

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