FastBeat Soil DNA Kit (Bead Beating) FastBeat 土壤 DNA ti取試劑盒（珠磨法）

土壤基因組DNA快速ti取試劑盒 核酸提取

目錄號：40415

  Kit Contents and Storage

All reagents, when store in indicated temperature, are stable for 9 months.

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準 

描述：

FastBeat 土壤 DNA 試劑盒可在不到 40 分鐘的時間內(nèi)直接從土壤樣品中快速有效地分離 PCR 即用型基因組 DNA。專為與 MP Biomedicals 的 FastPrep® 儀器等微珠打動設(shè)備配合使用而設(shè)計，可在 40 秒內(nèi)輕松裂解土壤生物種群。將樣品放入含有 3 種珠子的 2.0 ml 管中，珠子是陶瓷和二氧化硅顆粒的混合物，旨在有效裂解所有土壤生物，包括歷shi上難以溶解的來源，如真細菌孢子和內(nèi)生孢子、革蘭氏陽性菌、酵母、藻類、線蟲和真菌。

該套件使用一種新穎的專有方法來去除高腐植酸含量，包括堆肥、沉積物和糞便等難處理的土壤類型。分離的 DNA 純度高，可以更成功地從樣品中對生物體進行 PCR 擴增。已經(jīng)進行了 PCR 分析以檢測多種生物體，包括細菌（例如枯草芽孢桿菌、炭疽桿菌）、真菌（例如酵母、霉菌）、藻類和放線菌（例如鏈霉菌）。

使用前的重要注意事項

向樣品中加入磷酸鈉和 MT 緩沖液后，微珠管中的填充體積應在樣品管中留出足夠的空氣空間，以便進行高效的 FastPrep® 儀器處理。MP Biomedicals 建議使用 500 mg 起始材料，只要試管中有 250 - 500 μl 的空隙。微珠管過量填充可能導致樣品損失或試管故障。珠管蓋必須牢固，但不能擰得過緊，以防止樣品泄漏。如果樣品太大而無法在單個試管中處理，請分樣并使用多個試管進行處理。這些試劑盒已在 FastPrep® 儀器中進行了嚴格測試。在 FastPrep® 儀器中以 6.0 的速度運行一次 40 秒就足以裂解幾乎所有樣品。如果用戶通過實驗確定需要額外的處理時間，則應在連續(xù)的 FastPrep® 儀器勻漿之間將樣品在微珠管中的冰上孵育至少 2 分鐘在連續(xù)的 FastPrep® 儀器均質(zhì)化之間，以防止樣品和試管過熱。

如果您使用其他打珠設(shè)備，請按照制造商的說明手冊設(shè)置適當?shù)膮?shù)以獲得良好的性能。

程序

注意：

e  shou次使用前，將zhi定量的乙醇加入 PQ 溶液瓶、緩沖 WB 瓶中，充分混合，并在瓶子上打勾標記。

1.       向微珠管中加入多達 500 mg 的土壤樣品。

2.       向微珠管中的樣品中加入 980 μl 磷酸鈉緩沖液。溫和的 votex 混合。加入 120 μl MT 緩沖液。

注意：檢查 MT 緩沖區(qū)。如果 MT 緩沖液沉淀，請在使用前將溶液加熱至 60°C 直至溶解。

3.     在 FastPrep® 儀器中以 6.0 的速度設(shè)置 40 秒。

4.      以 12,000 x g 離心 5 分鐘以沉淀碎片。

5.     將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的 2.0 ml 離心管中。加入 250 μl PPS 溶液，用手搖動試管 10 次混合。在 4°C 下孵育 5 分鐘。

6.      在室溫下以 10,000 x g 離心管 3 分鐘。避免沉淀，將最多 900 μl 上清液轉(zhuǎn)移到干凈的 2 ml 離心管中，但不超過 900 μl。

7.       加入 300 μl IRS 溶液（1/3 體積）并短暫渦旋。在 4°C 下孵育 5 分鐘。

8.       在室溫下以 10,000 x g 離心管 1 分鐘。避免沉淀，將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的 5 ml 離心管中。

9.   向澄清的上清液中加入 1.5 體積的 PQ 溶液，并通過移液混合。

示例：向 1100 μl 裂解物中加入 1650 μl PQ 溶液。如果回收的上清液較少，則相應地減少 PQ 溶液的量。加入乙醇后可能會形成沉淀，但這不會影響手術(shù)過程。

注意：確保已將乙醇添加到 PQ 溶液中。

注意：將 PQ 溶液直接移液到澄清的上清液上并立即混合非常重要。

10.    將大約 700 μl 混合物加載到離心過濾器（位于收集管中）上，并在室溫下以 10,000 x g 離心 1 分鐘。丟棄流出。再加載 700 μl 并重復，直到所有剩余的混合物都加載到離心過濾器上。

注意：處理的每個樣品可能需要總共 4-5 次加載。

11.    向離心過濾器中加入 600 μl 緩沖液 WB，并在室溫下以 10,000 x g 離心 30 秒。丟棄流出。用另一個 600 μl 緩沖液 WB 重復步驟 11。

注意：確保將乙醇添加到緩沖液 WB 中。

12.  在室溫下以 13,000 x g 離心離心過濾器 2 分鐘以干燥離心過濾器。

13.    小心地將離心過濾器放入干凈的 1.5 ml 離心管中。避免將任何緩沖液 WB 濺到離心過濾器上。將 100 μl 洗脫緩沖液（可選：將水預熱至 70–90°C 將提高 DNA 產(chǎn)量）至柱膜中心。在室溫下孵育 3-5 分鐘，然后以 13,000 x g 離心 1 分鐘以洗脫 DNA。

注意：使用較小體積（最少 30 μl）的洗脫緩沖液將獲得更高的濃度。

可選：將洗脫液放回離心柱中，重復洗脫一次。這會增加 DNA 的濃度約 10-15%。

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