凝固血液基因組DNAti取試劑盒（溶液型）

凝固全血基因組DNAti取系統(tǒng) 核酸提取

目錄號(hào):40311

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

異丙chun、70％乙chun

保存條件：

室溫（15~25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn) 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

適用于從凝固血液樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。

首先細(xì)胞核裂解液配合蛋白meiK裂解凝固xue塊釋放出基因組DNA， 然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA在Sigma的分子生物學(xué)級(jí)Glycogen的助沉下通過(guò)異丙chun沉淀并重溶解于DNA溶解液。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.簡(jiǎn)便快速：30 min 內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA。

2.      安全無(wú)毒：無(wú)需苯fen/lv仿抽提。

3.      高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量 1 ml 全血可提取出 10～30µg 基因組 DNA。

4.      高純：OD260/280=1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá) 50～150 kb，可直接進(jìn)行可直接用于構(gòu)建文庫(kù)、PCR、、mei切、Southern-blot 等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1.   本試劑盒可運(yùn)用于多種抗凝劑的全血，如 EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細(xì)胞沉淀團(tuán)很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標(biāo)本。

2.    為了最jia效果，最hao使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過(guò)3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

3.   不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，血液DNA產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大。

4.   如果結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

5.    本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴(kuò)大或者縮小每次處理的全血量（20µl-10ml），請(qǐng)聯(lián)系我們索取其它處理量的操作手冊(cè)。

6.    DNA溶解液是TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），長(zhǎng)期保存DNA，但是EDTA可能下游mei切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。

操作步驟：

1.   加入50μl 凝固血液至一個(gè) 1.5ml 離心管或1ml 凝固血液至一個(gè)

50ml 離心管，劇烈渦旋或者用手劇烈拍打離心管幫助打散凝xue塊。

2.   加入550μl 或11ml 細(xì)胞核裂解液，吹打混勻，再加入3μl 或60μl 蛋白mei K(20mg/ml)，顛倒混勻 25 次。

3.   55℃放置 3 小時(shí)至過(guò)夜，直到所有的凝塊wan全融解。

4.    可選步驟（一般不需要做）：加入3μl 或60μl RNase A（4mg/ml），在裂解物中加入 RNase A（10mg/ml）至終濃度 30μg/ml，顛倒 25 次混勻，37℃溫育 15 分鐘去除殘留RNA。

5.   將裂解物迅速冷卻到室溫（可置冰上一分鐘）。

6.   加入200μl 或4ml 蛋白沉淀液，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻

25 秒，混勻后可能見到一些小的蛋白團(tuán)塊。

注意：液體確實(shí)要旋轉(zhuǎn)著振蕩起來(lái)，而不僅僅是上下振動(dòng)，這樣混勻效果和沉淀蛋白效果最jia。

7.   置冰上5 分鐘 或10 分鐘。

8.   13,000-16,000 x g 離心 5 分鐘或2,500 x g(可根據(jù)需要調(diào)整加大離心力)離心 10 分鐘。這時(shí)候應(yīng)該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。

9.   小心吸取上清到一個(gè)新的1.5ml 離心管 或50ml 離心管中。

注意：吸取上清時(shí)，注意不要吸到管底的和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心 2 分鐘后取上清。

10.  加入600μl 的室溫異丙chun和 1μl Glycogen 溶液或12ml 室溫異丙chun和 20μl Glycogen 溶液，輕柔顛倒 50 次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色 DNA 沉淀。（注意：處理樣品量大的時(shí)候才可能看見絲狀沉淀，

處理樣品量少或者保存質(zhì)量不好的時(shí)候往往看不見。）

11.  13,000-16,000 x g 離心 1 分鐘或2,500 x g 離心 3 分鐘，這時(shí)候應(yīng)該看到管底白色的 DNA 沉淀。

12.  小心棄上清，倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙chun（注意不要丟失沉淀）。

13.  加入600μl 或12ml 70%乙chun，顛倒幾次漂洗DNA 沉淀。

14.  13,000-16,000 x g 離心 1 分鐘或2,500 x g 離心 1 分鐘, 倒去上清

（沉淀很松，注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙chun，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙chun，空氣晾干沉淀幾分鐘。

注意：不要干燥過(guò)頭，否則 DNA 極其難溶；也不能殘留太多乙chun，否則乙chun可能抑制下游如mei切反應(yīng)。

15.  加入20μl 或250-400μl TE 緩沖液(或者客戶根據(jù)需要選擇的緩沖液)重新水化溶解DNA 沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在 65℃溫育 30-60分鐘（不要超過(guò)一小時(shí)），也可以在室溫或者 4℃放置過(guò)夜來(lái)重新水化 DNA，中間不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水化 DNA。

16.  DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。

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