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NADP-蘋果酸脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列
簡(jiǎn)要描述:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH 是TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。
NADP-蘋果酸脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列

  • 產(chǎn)品型號(hào):BE6006
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2025-07-17
  • 訪  問(wèn)  量:239
詳情介紹


NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 /48 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH NADP-依賴的MDH, NADP-MDH 主要存在于真核細(xì)胞中。

測(cè)定原理:

NADP-MDH 催化NADPH 還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。


NADP-蘋果酸脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列

組成:

產(chǎn)品名稱

BE6006-50T/48S

Storage

試劑一:提取液

60 ml

4℃

試劑二:液體

50 ml

4℃

試劑三:粉劑

2

-20℃

試劑四:粉劑

2

-20℃

說(shuō)明書

一份

 

試劑三、粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μl 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四、粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μl 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿和蒸餾水。

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(ml) 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml) 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑二在 37℃(哺乳動(dòng)物) 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

3、操作表:

試劑名稱(μl)

測(cè)定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10

將上述試劑按順序加入 1 ml 石英比色皿中,混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min

后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意:A1-A2 大于 0.5,需將樣本用提取液稀釋,使 A1-A2 小于 0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NADP-MDH 活力單位的計(jì)算

1、血清(漿)NADP-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/ml)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=6430×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×500)÷T=12.86×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑, 1cm;V 樣:加入樣本體積,0.02 ml;V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。

NADP-蘋果酸脫氫酶試劑盒 輔酶Ⅰ系列


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