超氧陰離子清除能力試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測(cè)定原理：

AP-TEMED 系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成 NO2－，NO2－與對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與 530nm 的吸光值呈負(fù)相關(guān)。

超氧陰離子清除能力試劑盒   抗氧系列

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

樣品處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 4℃，10000g離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。

粉劑藥物可配制成相同濃度，比如 1mg/ml

測(cè)定操作表：

注意：對(duì)照管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式:

超氧陰離子清除率 I%= A對(duì)照管- A測(cè)定管′100%

A對(duì)照管

注意事項(xiàng)：

1. 試劑一 4℃可保存 2 個(gè)月，配制好的試劑二 4℃可保存一周，建議實(shí)驗(yàn)前配制，并盡快使用。

2. 樣品處理完后立即進(jìn)行測(cè)定，或者低溫保存不超過(guò) 24 小時(shí)。

超氧陰離子清除能力試劑盒   抗氧系列