諾博萊德 超氧陰離子含量檢測(cè)試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

超氧陰離子含量檢測(cè)試劑盒 抗逆系列

產(chǎn)品貨號(hào)：BC9073

產(chǎn)品名稱：超氧陰離子含量檢測(cè)試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

自備試劑：該試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需自備試劑，詳情見(jiàn)網(wǎng)站說(shuō)明書(shū)

中文名稱：超氧陰離子含量檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

別名：超氧陰離子試劑盒 超氧陰離子測(cè)試盒

規(guī)格：100T/96S

檢測(cè)方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC9073超氧陰離子含量檢測(cè)試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

測(cè)定意義：生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

測(cè)定原理：超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)A530值可以計(jì)算樣品中O2－含量。

需要的儀器，耗材:天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。

表中標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定。

產(chǎn)品說(shuō)明：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO₂，NO₂在對(duì)氨基苯磺酰胺和萘乙二胺鹽酸鹽的作用下，生成紫紅色的偶

氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根據(jù)A₅₃₀值可以計(jì)算樣本中O₂含量。

技術(shù)指標(biāo):

最di檢出限:0.001 μmol/mL

線性范圍:0.0015-0.25 μmol/mL

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、水浴鍋、離心機(jī)、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、氯仿(>98%，AR)、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g，加入1mL提取液)加入提取液，冰浴勻漿后，12000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

2.細(xì)胞/細(xì)菌:按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量(106個(gè)):提取液體積(mL)為5~1:1的比例(建議5百萬(wàn)細(xì)胞/細(xì)菌加入1mL提取液)，冰浴超聲波破碎細(xì)胞/細(xì)菌(功率200w，超聲3秒，間隔10秒，總時(shí)間3min):12000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)

3.血清/血漿等液體:直接測(cè)定。若有渾濁，離心后取上清使用。

二、測(cè)定步驟:

1.分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

三、超氧陰離子含量計(jì)算公式:

1. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算:

超氧陰離子含量(μmol/g質(zhì)量)2xΔA 測(cè)定+(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))xV提取÷W

=0.0625xΔA 測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率(μmol/min/g質(zhì)量)=2xΔA測(cè)定÷(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))xV 提取+W+T

=0.003125xΔA 測(cè)定+△A標(biāo)準(zhǔn)+W

2.按照樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算:

超氧陰離子含量(μmol/mg prot) =2x△A測(cè)定+(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))xV樣本+(V樣本xCpr)

=0.0625xΔA 測(cè)定-△A標(biāo)準(zhǔn)+Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率(umol/min/mg prot)= 2xΔA測(cè)定+(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))xV 樣木+ (V 樣木xCpr) ÷T

=0.003125xΔA 測(cè)定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

3.按照液體樣本體積計(jì)算:

超氧陰離子含量(umol/mL) =2xΔA 測(cè)定+(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))

=0.0625xΔA 測(cè)定÷△A標(biāo)準(zhǔn)

超氧陰離子產(chǎn)生速率(μmol/min/mL) =2xΔA 測(cè)定÷(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))÷T

=0.003125xΔA 測(cè)定÷△A標(biāo)準(zhǔn)

4.按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算:

超氧陰離子含量(μmol/106cell)=2xΔA 測(cè)定+(ΔA標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))xV提取+N

=0.0625xΔA 測(cè)定÷△A標(biāo)準(zhǔn)+N

超氧陰離子產(chǎn)生速率(μmol/min/106cell) = 2xΔA 測(cè)定÷(△A標(biāo)準(zhǔn)+C標(biāo)準(zhǔn))xV提取+N+T

=0.003125xΔA 測(cè)定+△A標(biāo)準(zhǔn)+N

C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管的濃度，0.03125μmol/mL:V樣本:參與反應(yīng)樣本體積，0.1mL:V提取:提取過(guò)程中加入的提取液體積，1mL:Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL:W:樣本質(zhì)量，g:N:細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量，以10計(jì):T:反應(yīng)時(shí)間，20min;2:2分子的O2反應(yīng)生成1分子NO2。

注意事項(xiàng):

1、若 ΔA 測(cè)定<0.01，建議增大樣本量或延長(zhǎng)第一步反應(yīng)時(shí)間后測(cè)定:若△a測(cè)定>1.2，建議稀釋樣本后進(jìn)行測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式。

2、樣本上清液制備好后，立刻進(jìn)行測(cè)定，請(qǐng)勿將樣本進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的低溫保存，以免影響測(cè)定結(jié)果。

3、試劑四為有機(jī)試劑，建議每次吸取時(shí)更換吸頭，由于該試劑有一定的毒性，操作時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施。

超氧陰離子含量檢測(cè)試劑盒 抗逆系列

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