諾博萊德 氧化型gu胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒 Oxidized Glutathione(GSSG) Content Assay Kit

氧化型gu胱甘肽含量檢測(cè)試劑盒 抗逆系列

產(chǎn)品貨號(hào)：BC9963

產(chǎn)品名稱：氧化型gu胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒 Oxidized Glutathione(GSSG) Content Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：氧化型gu胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Oxidized Glutathione(GSSG) Content Assay Kit

別名：氧化型gu胱甘肽含量測(cè)定試劑盒 GSSG Kit 氧化型gu胱甘肽（GSSG）含量測(cè)定試劑盒 氧化型gu胱甘肽（GSSG）含量測(cè)試盒

規(guī)格：100T/96S

檢測(cè)方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC9963氧化型gu胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒 Oxidized Glutathione(GSSG) Content Assay Kit

測(cè)定意義：GSH/GSSG是細(xì)胞內(nèi)最重要的氧化還原對(duì)之一。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)，也是gu胱甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一。

測(cè)定原理：利用2-VP法測(cè)GSSG含量。

需要的儀器，耗材:低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

產(chǎn)品說明：

氧化型gu胱甘肽(GSSG)是gu胱甘肽(GSH)的氧化形式，又稱為二硫代gu胱甘肽，是兩分子的gu胱甘肽氧化而成。GSSG會(huì)被gu胱甘肽還原酶還原成GSH，因此機(jī)體中大多數(shù)是以還原型形式存在。測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用gu胱甘肽能和5.5-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5.5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid，DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基苯甲酸，2-硝基-5-巰基苯甲酸在波長412nm處具有最大光吸收的特點(diǎn)，通過2-乙烯吡啶抑制樣本中原有的還原型gu胱甘肽，然后利用gu胱甘肽還原酶將GSSG還原為GSH，借此測(cè)定氧化型gu胱甘肽的含量。

技術(shù)指標(biāo):

最di檢出限:3.211μg/mL

線性范圍:3.9-125μg/mL

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、分析天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、勻漿器/研缽/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿(勻漿器/研缽提前放冰上預(yù)冷)。12000g，4℃離心10min，取上清液放置于4℃待測(cè)。若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80C保存(可保存3天)。

2.細(xì)菌、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(106個(gè)):試劑一體積(mL)為5~10:1的比例(建議5百萬細(xì)胞加入1mL試劑

一)，反復(fù)凍融2-3次(可在液氮中凍結(jié)、37C水浴中溶解)或者冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率200w，超聲 3s,間隔10s，重復(fù)30次)，12000g，4℃離心10分鐘，取上清置于冰上待測(cè)。若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存3天)。

3.血液處理

血漿:將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體積的試劑一，沸水浴5min(纏封口膜，防止爆蓋)。之后12000g，4℃離心10分鐘，將上清移入新的試管中放置于4C待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存3天)。

血細(xì)胞:將收集的抗凝血于4℃，600g離心10分鐘，棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細(xì)胞，600g離心10分鐘)，加入等體積試劑一，沸水浴5min(纏封口膜，防止爆蓋)。之后12000g，4℃離心 10分鐘，吸取上清放于4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80C保存(可保存3天)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、試劑三放置37°C水浴中保溫30min。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:吸取10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水稀釋至125μg/mL、62.5μg/mL、31.25μg/mL、15.625μg/mL、7.8125μg/mL、3.90625μg/mL.

三、GSSG含量計(jì)算

1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:

以標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)x，以(△A標(biāo)準(zhǔn)-△A空白)為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將(AA測(cè)定-△A空白)帶入公式計(jì)算樣本濃度(μg/mL).

2.GSSG含量計(jì)算:

(1)按蛋白濃度計(jì)算:GSSG含量(μg/mg prot)=xxV樣+(V樣xCpr )=x+Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算:GSSG含量(μg/g質(zhì)量)=xxV 樣+(V 樣+V 樣總xW)=x÷W

(3)按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算:GSSG含量(μg/106 cell)=xxV 樣+(V 樣+V 樣總xN)=x+N

(4)按液體體積計(jì)算:GSSG含量(μg/mL)=2x

V樣總:上清液總體積，1mL;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL;W:樣本質(zhì)量，g;

Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL;N:細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量，以10計(jì);2:血漿(血細(xì)胞)稀釋一倍。

注意事項(xiàng):

1.若不確定樣本中GSSG含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。

2.如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣大量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

3.因?yàn)樵噭┮恢泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。如需測(cè)定蛋白含量，需另取組織。

氧化型gu胱甘肽含量檢測(cè)試劑盒 抗逆系列

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BC9963氧化型gu胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒 Oxidized Glutathione(GSSG) Content Assay Kit 100T/96S