諾博萊德 金擔(dān)子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA

金擔(dān)子素A（AbA）   輔助試劑

產(chǎn)品貨號：A6868

產(chǎn)品名稱：金擔(dān)子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA

產(chǎn)品規(guī)格：1mg

產(chǎn)品簡介：                          

別名：AbA

英文名稱：Aureobasidin A

分子式：C₆₀H₉₂N₈O₁₁

分子量：1100

儲存條件：2-8℃，有效期2年

規(guī)格：1mg

外觀(性狀)：白色凍干粉

純度：≥95%

溶解性：0.5mg/mL 無水乙醇

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder A6868 金擔(dān)子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA

產(chǎn)品介紹          

金擔(dān)子素A（Aureobasidin A，AbA）是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力。在較低的濃度下（0.1-0.5 μg/ml）即可對酵母產(chǎn)生毒性。對其敏感的真菌種類包括：出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構(gòu)巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。作用機(jī)制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而進(jìn)一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因，以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進(jìn)行突變即可使得菌株對AbA產(chǎn)生抗性，如AUR1-C基因。

AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報(bào)告子。

操作步驟（抗AbA的酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng)）

1）加入0.5 ml過夜培養(yǎng)的酵母到50 ml YPD培養(yǎng)基中（配方：1L液體培養(yǎng)基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose；固體培養(yǎng)基另外加入2%瓊脂；）。

2）30℃培養(yǎng)約6小時(shí)，測定OD660為1～2。使用二倍體時(shí)，測定OD660為2～4。

3）1,000×g離心5分鐘。

4）用10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA）懸浮沉淀，1,000×g離心5分鐘。

5）用Solution A重懸沉淀，直到OD660為150。

6）在管內(nèi)分取100 µl細(xì)胞懸浮液，30℃培養(yǎng)1小時(shí)。

7）加入5 μg載體（環(huán)狀或線性DNA）和150 μg Carrier DNA（已經(jīng)過100℃加熱10分鐘，并迅速冷卻）。

【注】：pAUR101需使用線性DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。使用環(huán)狀DNA會降低轉(zhuǎn)化效率甚至轉(zhuǎn)化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質(zhì)粒DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

8）加入850 µl Solution B（配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解，需要現(xiàn)用現(xiàn)配），輕輕混勻。

9）30℃培養(yǎng)30分鐘后，42℃培養(yǎng)15分鐘。

10）室溫放置10分鐘。

11）5,000 rpm離心1分鐘，用5 ml YPD培養(yǎng)基懸浮沉淀。

12）30℃培養(yǎng)6小時(shí)~過夜。

13）5,000~10,000 rpm離心，用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。

14）在YPD選擇培養(yǎng)基平板（含有一定濃度的AbA，依菌株類型而定）上接種100 µl細(xì)胞懸液。30℃培養(yǎng)3-4天后轉(zhuǎn)化完成。

15）挑取陽性轉(zhuǎn)化子，和/或測定轉(zhuǎn)化效率（以每微克質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化的菌落數(shù)來表示）。

 備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

金擔(dān)子素A（AbA）   輔助試劑

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