諾博萊德 過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒  抗逆系列

產(chǎn)品貨號(hào)：BC8878

產(chǎn)品名稱(chēng)：過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒

英文名稱(chēng)：Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

規(guī)格：50T/48S

檢測(cè)方法：可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC8878過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物，具有消除過(guò)氧化氫和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。POD催化H₂O₂氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液)，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次);8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液)，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。

注:該試劑盒的樣本勻漿上清也可用于BC0170/BC0175(超氧化物歧化酶)、BC5160/BC5165(超氧化物歧化酶)、BC0020/BC0025(丙二醛)、BC0200/BC0205(過(guò)氧化氫酶)、BC0680/BC0685(乳酸脫氫酶)的測(cè)定。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至470nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測(cè)定前將試劑一、試劑二工作液和試劑三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)放置10min。

在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄470nm下30s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算△A=A2-A1.

三、POD 活性計(jì)算

1、血清(漿)POD活性

單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

POD (U/mL) =ΔAxV 反總+V 樣+0.01+T-7133x△A

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

POD(U/mg prot)=ΔAxV 反總÷ (V樣xCpr)+0.01+T=7133xΔA÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

POD(U/g質(zhì)量)=ΔAxV 反總+(WxV樣+V 樣總)+0.01+T =7133xΔA+W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

POD (U/10⁴cell) =ΔAxV 反總+(500xV樣+V樣總)+0.01+T=14.27x△A

V反總:反應(yīng)體系總體積，1.07mL:V樣:加入樣本體積，0.015mL:V樣總:加入提取液體積，1mL:T:反應(yīng)時(shí)間，1min:Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL:W:樣本質(zhì)量，g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。

注意事項(xiàng):

1.若一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑一、試劑二工作液、試劑三和蒸餾水按比例配成混合液，在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)放置10min以上，測(cè)定時(shí)加入15μL樣本和1055μL混合液測(cè)定。

2.如果△A小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果△A大于0.5或者反應(yīng)液中有較多氣泡產(chǎn)生，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)試劑盒  抗逆系列

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