諾博萊德 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

葉綠體蛋白提取試劑盒-非酶法 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5059

產(chǎn)品名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5059 葉綠體蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-非酶法

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。葉綠體蛋白提取試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過(guò)程中大部分葉綠體會(huì)被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。

葉綠體蛋白提取試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可從各種植物樣本中快速提取得到葉綠體總蛋白。

本試劑盒適用于提取新鮮植物樣本的葉綠體蛋白，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過(guò)程中大部分葉綠體會(huì)被破壞，葉綠體蛋白回收率較低。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解葉綠體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry,MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在1小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的葉綠體總蛋白，回收率提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒(méi)有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、100μm細(xì)胞篩、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

4. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

5. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

6. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

7. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果

二、葉綠體蛋白提?。?/span>

1. 提取液制備：

將試劑 C1 和試劑 C2 混合，配成蛋白提取液 C，充分混勻備用。

每 500μl 蛋白提取液 C 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】

1)蛋白提取液 C 置 4℃保存，長(zhǎng)期不用的可以分裝后-20℃保存。

2)根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

3)加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

4)以下步驟中提到的蛋白提取液 C 為本步驟配制的提取液 C。

2. 取 200-500 mg 新鮮植物樣本葉片，洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。用手術(shù)jian刀盡可能剪碎。

3. 加入 1 ml -2 ml 試劑 A，用勻漿機(jī)/組織攪碎機(jī)/Dounce 勻漿器充分勻漿。

4. 將勻漿液用 100μm 細(xì)胞篩過(guò)濾。

【注】:

1)沒(méi)有細(xì)胞篩的話，在 4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團(tuán)組織塊等沉降，或者以低于 100×g 力條件下離心 1 分鐘，收集細(xì)胞上清，棄較大組織塊沉淀。

2)有些含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將 1m 吸頭尖稍微剪掉一點(diǎn)使用。

3)液體量較少細(xì)胞篩不好過(guò)濾時(shí)可以補(bǔ)加 2ml PBS 緩沖液后過(guò)濾。

5. 將濾液在 500×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 800×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清 3000×g 力離心 15 分鐘，棄上清，收集沉淀。

8. 將沉淀用 1 ml 試劑 B 重懸。

9. 將懸液 3000×g 離心 15 分鐘，棄上清，收集沉淀。

10. 在沉淀中加入 100-300μl 葉綠體蛋白提取液 C，充分混勻。

11. 將蛋白提取液在 4℃條件下振蕩 20-45 分鐘。

【注】:

1)振蕩時(shí)用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動(dòng)即可。

2)沒(méi)有振蕩條件也可不振蕩，置 4℃℃靜置，稍微延長(zhǎng)試劑 C 處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

3)試劑 C 處理時(shí)間根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整。至葉綠體充分裂解，離心后沉淀體積減少。

12. 在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到葉綠體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】:

1)建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2)蛋白樣品-80℃℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

15. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于不能含有去污劑/鹽的下游實(shí)驗(yàn)。

【注】

1)蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2)經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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