諾博萊德 植物高爾基體蛋白提取試劑盒

高爾基體蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5062

產(chǎn)品名稱：植物高爾基體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物高爾基體蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5062 植物高爾基體蛋白提取試劑盒

植物高爾基體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體蛋白。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解高爾基體組份，本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、蛋白活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以 2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物高爾基體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體蛋白。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解高爾基體組份，本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、蛋白活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳。

除了高爾基體提取試劑盒，還有細(xì)胞核提取、線粒體提取等各種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的提取試劑盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、Dounce勻漿器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

7. 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒(méi)有Dounce勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是高爾基體回收率會(huì)下降。

二、操作步驟

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 C 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 蛋白樣品用于測(cè)定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

4) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取200-500mg新鮮植物葉片組織樣本，用PBS洗滌干凈。

3. 用手shu剪刀盡可能剪碎。

【注】：

1) 也可用刀片將葉片樣本切成小塊。

4. 加入1ml冷的試劑A，置冰上10分鐘。

5. 用Dounce勻漿器充分勻漿30-40次。

【注】：

1) 每上下一個(gè)來(lái)回為一次。

2) 也可以用電動(dòng)勻漿機(jī)充分勻漿。

6. 將勻漿液在4℃，1000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在4℃，3000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

8. 將上清在4℃，6000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

9. 將上清在4℃，50000×g條件下離心20分鐘。

【注】：

1) 沒(méi)有50000×g離心條件，可以降低離心力。

2) 至少要保證20000×g以上離心力。

3) 降低離心力后高爾基體蛋白回收率會(huì)下降。

10. 棄上清，在沉淀中加入500μl冷的試劑B，混勻。

11. 在4℃，50000×g條件下離心30分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 沒(méi)有50000×g離心條件，可以降低離心力。

2) 至少要保證20000×g以上離心力。

3) 降低離心力后高爾基體回收率會(huì)下降。

12. 在沉淀中加入100-300μl冷的蛋白提取液C，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻

即可。

13. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。

14. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到高爾基體蛋白。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品－80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底， 避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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