諾博萊德  TaqMan One Step RT-qPCR Kit

Taqman一步法熒光定量PCR試劑盒   核酸檢測(cè)

產(chǎn)品貨號(hào)：T0098

產(chǎn)品名稱(chēng)：TaqMan One Step RT-qPCR Kit

產(chǎn)品別名：Taqman一步法熒光定量PCR試劑盒，一步法實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/200T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：Store at -20℃，1 year.

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderT0098  TaqMan One Step RT-qPCR Kit本產(chǎn)品是采用探針?lè)ǎ?/span>TaqMan，Molecular Beacon等）進(jìn)行一步法Real-Time RTqPCR的專(zhuān)用試劑盒。使用本產(chǎn)品進(jìn)行RealTime RT-qPCR反應(yīng)時(shí)，逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行，反應(yīng)過(guò)程中無(wú)需添加試劑，無(wú)需打開(kāi)管蓋，避免了污染的同時(shí)提高了實(shí)驗(yàn)效率。本產(chǎn)品的檢測(cè)靈敏度高，熒光信號(hào)強(qiáng)，信噪比高，非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測(cè)。其所包含的特殊緩沖系統(tǒng)能使逆轉(zhuǎn)錄酶與DNA聚合酶同時(shí)發(fā)揮最大功效，提高反應(yīng)效率。使用本產(chǎn)品可以得到更寬廣的線性范圍，對(duì)目的基因定量更準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可信度高。

試劑原理：

TaqMan One Step RT-qPCR kit 首先利用反轉(zhuǎn)錄酶RTase將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板 通過(guò)熱啟動(dòng)DNA擴(kuò)增酶在單管閉管反應(yīng)體系中連續(xù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，利用熒光標(biāo)記探針（Probe） 水解發(fā)光，并對(duì)發(fā)光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。

1. RT-PCR

首先采用反轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成 cDNA，然后再以合成的cDNA為模板，經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的 熱變性、引物退火、鏈延伸三個(gè)步驟循環(huán)往復(fù)，在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增得到大量DNA片段。

2. 熒光檢出

TaqMan 探針?lè)ㄊ鞘褂?5’端帶有熒光物質(zhì)，3’端帶有淬滅物質(zhì)的 TaqMan 探針進(jìn)行熒光檢測(cè)的方法。 在探針沒(méi)有被 Taq 酶分解時(shí)，5’端的熒光物質(zhì)受到 3’端淬滅物質(zhì)的制約，不能發(fā)出熒光。而當(dāng) TaqMan 探針被分解后，5’端的熒光物質(zhì)便會(huì)游離出來(lái)，發(fā)出熒光。在 PCR 反應(yīng)液中加入熒光探針后的退火 過(guò)程中，熒光探針便會(huì)和模板配對(duì)區(qū)域結(jié)合。在 PCR 反應(yīng)的延伸過(guò)程中，TaqDNA聚合酶的 5’→3’ 核酸外切酶活性可以分解和模板雜交的熒光探針，游離出的熒光物質(zhì)便會(huì)發(fā)出熒光。通過(guò)檢測(cè)反應(yīng) 體系中的熒光強(qiáng)度，可以達(dá)到檢測(cè) PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。

RT-PCR 反應(yīng)體系配制

1. 通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在0.1～1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度；

2. 通常探針濃度可在0.1～0.3μM范圍內(nèi)優(yōu)化?？蛇M(jìn)行濃度梯度的實(shí)驗(yàn)，尋找引物和探針的優(yōu)良組合。探針的使用與RealTimePCR擴(kuò)增儀、探針?lè)N類(lèi)、熒光標(biāo)記物質(zhì)種類(lèi)有關(guān)，請(qǐng)參照儀器說(shuō)明書(shū)或各熒光探針的具體使用要求進(jìn)行；

3. 不同種類(lèi)的模板中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時(shí)可進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)_定優(yōu)良的模板添加量。

質(zhì)量控制：

1. 功能檢測(cè)：qPCR的敏感性、特異性、可重復(fù)性；

2. 無(wú)外源核酸酶活性，無(wú)外源內(nèi)切、外切核酸酶污染。

技術(shù)說(shuō)明：

1. 該體系常用50℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，可以在45℃~60℃范圍內(nèi)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄溫度優(yōu)化；根據(jù)反應(yīng)特征不同，可以在5~30分鐘內(nèi)對(duì)反轉(zhuǎn)錄時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化；

2. 該體系所用的反轉(zhuǎn)錄酶是在MMLV基礎(chǔ)上進(jìn)行了基因改造，去除了RNaseH活性，使其具有更高的溫度耐受性和反轉(zhuǎn)錄溫度，對(duì)RNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)模板具有更高的反轉(zhuǎn)錄效率；

3. 該體系具有更好的體系穩(wěn)定性和適用性，非常適合于病毒類(lèi)、組織提取RNA復(fù)雜模板的檢測(cè)；對(duì)極限濃度模板的擴(kuò)增效果更加穩(wěn)定。

Taqman一步法熒光定量PCR試劑盒   核酸檢測(cè)

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T0098  TaqMan One Step RT-qPCR Kit  50T/200T