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微量法 100T/96S
UA 是鳥類和爬行類動物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。此外,UA還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi)UA 生成量和排泄量不平衡會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如,血中UA 升高會引起痛風(fēng)、腎功能損害和動脈硬化,相反UA 降低會引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。
尿酸酶能催化UA 生成尿囊su,CO2 及H2O2,H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成Fe3+ ,F(xiàn)e3+進(jìn)一步與酚和 4-氨基安替bi林縮合生成紅色醌類化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,測定反應(yīng)體系 505nm的吸收值,可計(jì)算尿酸的含量。
產(chǎn)品名稱 | BD6006-100T/96S | Storage |
緩沖液:液體 | 20ml | 4℃ |
試劑一:A 粉末 | 1 瓶 | 4℃避光 |
試劑一:B 粉末 | 1 瓶 | 4℃避光 |
試劑二:粉末 | 1 瓶 | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
試劑一:
A:用于標(biāo)準(zhǔn)管和測定管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13ml 緩沖液溶解。
B:用于空白管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 ml 緩沖液溶解。
試劑二:粉劑 1 管,4℃避光保存,使用前加 2ml 蒸餾水溶解,60℃加熱溶解。
恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
1. 動植物組織:建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 生理鹽水或蒸餾水,進(jìn)行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2. 血清,培養(yǎng)液:直接檢測。
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 505nm。
2、操作表
標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | 測定管 | |
試劑一(μl) | A, 60 | B, 60 | A, 60 |
H2O(μl) | 180 | 240 | 180 |
試劑二(μl) | 60 | ||
樣品(μl) | 60 | ||
混勻,37℃水浴 30min,取 200μl 于微量石英比色皿/96 孔板中,測定 505nm 處各管吸光值,標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管。 |
1. 組織:
(1) 按樣本重量計(jì)算
尿酸含量(μmol/g 鮮重)=C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ (W÷V 樣總)
=0.5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ W
(2) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
尿酸含量(μmol/mg prot)=C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷ Cpr =0.5×(A
測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr
尿酸(μmol/L)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×103
=500×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
C 標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)品濃度 0.5μmol/ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:樣本蛋白濃度,
mg/ml;103 :1μmol/ L=103μmol/ ml
1. 血清樣本請?jiān)?/span> 24 小時(shí)內(nèi)測定,或者 4℃密封避光保存不超過 72 小時(shí)。
2. 吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本,并在計(jì)算公式中算入稀釋倍數(shù)。
3. zui低檢出限為 10μmol/L。
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