諾博萊德 膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)）常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5087

產(chǎn)品名稱(chēng)：膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5087 膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）

動(dòng)物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織提取總膜蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，基本可以滿(mǎn)足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(MassSpectrometry,MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑G為飽和溶液，有微量絮狀物不影響使用，可在37℃短時(shí)間水浴，離心取上清使用或直接離心取上清使用。

4. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

動(dòng)物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。

膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織提取總膜蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、Triton X-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，基本可以滿(mǎn)足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研 究。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移， 因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry, MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 提取液A在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

7. 膜蛋白電泳時(shí)loading buffer應(yīng)該避免煮沸。

8. 膜蛋白電泳時(shí)可以提高 loading buffer的SDS含量。

9. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

10. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

二、細(xì)胞膜蛋白提取：

1. 提取液制備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 500μl 膜蛋白溶解液 C 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取 5-10×10⁶ 個(gè)以上細(xì)胞，在 4℃，500g 條件下離心 3-5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 細(xì)胞樣品中加入 400μl 冷的試劑 A，充分混勻。

5. 在 2-8℃條件下振蕩 20-30 分鐘，至細(xì)胞充分裂解，細(xì)胞沉淀明顯減少。

6. 在 4℃，12000×g 條件下離心 5 分鐘。

7. 將上清吸入另一干凈離心管，在 37℃水浴 10 分鐘。

8. 在 37℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘，此時(shí)溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為 50μl。

9. 小心移除上層液體，收集上層部分留作備用分析。

10. 用 850μl 冷的試劑 C 膜蛋白溶解液溶解下層膜蛋白部分，即得膜蛋白粗提液。

11. 在 900μl 膜蛋白粗提液樣本中加入 100μl 試劑 E，充分混勻。

12. 冰浴或 4℃冰箱靜置 30 分鐘以上。

13. 在 4℃，15000×g 以上條件下離心 15 分鐘。

14. 小心移除上層清液丟棄，留沉淀。

15. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。

16. 加入 200μl 試劑 F 到離心管中。

17. 在 4℃，15000×g 以上條件下離心 15 分鐘。棄上清，留沉淀。

18. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。

19. 用 40-100μl 試劑 G 溶解蛋白沉淀，充分混勻。

20. 在 4℃，10000×g 條件下離心 10 分鐘。

21. 收集上清用于下游實(shí)驗(yàn)。

22. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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