諾博萊德 植物核蛋白提取試劑盒（酶法，pull-down適用）

植物核蛋白提取試劑盒 酶法 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5015

產(chǎn)品名稱：植物核蛋白提取試劑盒（酶法，pull-down適用）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物核蛋白提取試劑盒（酶法，pull-down適用）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5015 植物核蛋白提取試劑盒（酶法，pull-down適用）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒采用優(yōu)化的試劑配方組成，特別適用于下游進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的研究實(shí)驗(yàn)，包括免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-IP）、Pull-down 等實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白也可以用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的植物核蛋白，回收率提高，純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法的提取試劑盒提取過程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 提取液 A 長(zhǎng)期不用請(qǐng)置-20℃保存。

2. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

3. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

4. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套、100um 細(xì)胞篩。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 5 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、操作步驟

1. 提取液制備：

每200ul提取液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500mg植物組織樣本用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加入1-2ml PBS后用勻漿機(jī)充分勻漿或者加適量PBS后用勻漿器充分勻漿。

3. 將勻漿液用100um細(xì)胞篩過濾；

【注】：

1) 沒有細(xì)胞篩的話，在 4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團(tuán)組織塊等沉降，或者以低于100g力條件下離心1 分鐘，收集細(xì)胞上清，棄組織沉淀。

2) 有些含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將1ml 吸頭尖稍微剪掉一點(diǎn)使用。

4. 將濾液在2000×g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀。

5. 在沉淀中加入500ul提取液A，充分混勻。

【注】：

1) 培養(yǎng)細(xì)胞 1000×g 條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞后用

PBS洗滌2 次，然后直接加入提取液A 重懸。

2) 大約每300ul 細(xì)胞壓積中加入1ml 提取液A。

3) 一般加入樣本體積的2-3 倍體積的提取液A，充分淹沒樣本即可。

6. 將細(xì)胞懸液置振蕩器上37℃或室溫振蕩12-72小時(shí)。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

3) 根據(jù)下游蛋白的應(yīng)用選擇合適的溫度，優(yōu)良溫度為55℃。

4) 不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時(shí)間短。擬南芥嫩葉最短 4 小時(shí)即可。

5) 部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間?？梢匝娱L(zhǎng)至 72 小時(shí)以上處理以提高核蛋白得率。

7. 在2000×g 條件下離心 10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

8. 在沉淀中加入500ul-1ml提取液 B，用勻漿器充分勻漿，在勻漿液中補(bǔ)充提取液B至1ml，充分混勻。

9. 置振蕩器振蕩 5-10 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，置 4℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

10. 在2000×g 條件下離心 10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

11. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液C，高速渦旋振蕩5秒。

12. 置4℃振蕩20-40分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，置 4℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

13. 在4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

14. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

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