諾博萊德 酵母質(zhì)膜蛋白提取試劑盒

酵母質(zhì)膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P4968

產(chǎn)品名稱(chēng)：酵母質(zhì)膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：酵母質(zhì)膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4968 酵母質(zhì)膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。

酵母膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒，酵母膜蛋白提取試劑盒可以從各種酵母樣本中提取膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解酵母總膜組份，包括質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。 本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：酵母

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以 2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

二、酵母質(zhì)膜蛋白提?。?/span>

1. 提取液制備：

每 500ul 蛋白提取液 B 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取適量酵母培養(yǎng)物，在 4℃，2000×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

3. 用冷 PBS 洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 100-200ul 體積酵母沉淀物中加入 500ul 酵母質(zhì)膜蛋白提取液 A，混勻后，在室溫或 37℃條件下輕輕振蕩 30 分鐘-1 小時(shí)。

【注】：

1) 若后面步驟中試劑 B 處理時(shí)沉淀難以裂解，應(yīng)延長(zhǎng)此步試劑 A 的處理時(shí)間。

2) 有些酵母樣本細(xì)胞壁較厚，難以破壁，可以將試劑 A 處理時(shí)間延長(zhǎng)，最長(zhǎng)可以將試劑 A 處理時(shí)間延長(zhǎng)至 8 小時(shí)。

5. 在 4℃，2000g 條件下離心 5-10 分鐘，移除上清，收集沉淀。

6. 在沉淀物中加入 500ul 冷的（4℃）酵母質(zhì)膜蛋白提取液 B，混勻。

7. 在 2-8℃條件下輕輕振蕩 15-45 分鐘。

【注】：

1) 必須在 2-8℃條件下處理。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

3) 沒(méi)有 2-8℃振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4) 試劑 B 處理后沉淀應(yīng)減少，否則延長(zhǎng)處理時(shí)間。

5) 若延長(zhǎng)時(shí)間后沉淀仍難以裂解，應(yīng)延長(zhǎng)試劑 A 的處理時(shí)間。

8. 將提取液在 4℃條件下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

【注】：

1) 此時(shí)酵母膜蛋白已溶解于抽提液 B，酵母菌體沉淀會(huì)減少，若有大量未溶解酵母菌體，請(qǐng)延

長(zhǎng)步驟 4 和步驟 7 的振蕩時(shí)間，振蕩中途可用移液器吹打混勻。

9. 將上清在 37℃水浴 10 分鐘。

10. 在 37℃，1000×g 條件下離心 3 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須在 37℃離心。

2) 無(wú) 37℃條件離心也可不離心，延長(zhǎng) 37℃水浴時(shí)間至液體澄清，分層明顯即可。

11. 此時(shí)溶液分為 2 層，小心移除上層部分，留下管底部下層部分大約 30-50ul 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

12. 用 50-100ul 膜蛋白溶解液 C 溶解該下層溶液，即得酵母質(zhì)膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白如果不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置10 分鐘。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 如果 4℃靜置 10 分鐘后仍未有效混勻，可以稍微延長(zhǎng)靜置時(shí)間。

13. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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