諾博萊德 高爾基體提取試劑盒

高爾基體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P4934

產(chǎn)品名稱：高爾基體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：高爾基體提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P4934 高爾基體提取試劑盒

適用樣本：動物細胞/組織

產(chǎn)品介紹

高爾基體（Golgi apparatus, Golgi bodies）是由許多扁平的囊泡構成的以分泌為主要功能的細胞器。又稱高爾基器或高爾基復合體；高爾基體是由數(shù)個扁平囊泡堆在一起形成的高度有 極性的細胞器。常分布于內質網(wǎng)與細胞膜之間，呈弓形或半球形，凸出的一面對著內質網(wǎng)稱 為形成面（forming face）或順面（cis face）。凹進的一面對著質膜稱為成熟面（mature face）或反面（trans face）。順面和反面都有一些或大或小的運輸小泡，在具有極性的細胞 中，高爾基體常大量分布于分泌端的細胞質中。因其看上極像滑面內質網(wǎng)，因此有科學家認 為它是由滑面內質網(wǎng)進化而來的。

高爾基體中的酶主要有糖基轉移酶、磺基-糖基轉移酶、氧化還原酶、磷酸酶、蛋白激酶、 甘露糖苷酶、轉移酶和磷脂酶等不同的類型。高爾基體的主要功能將內質網(wǎng)合成的蛋白質進 行加工、對比分類、與包裝，然后分門別類地送到細胞特定的部位或分泌到細胞外。

本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的高爾基體提取。

注：

1. 提取液長期不用時置于-20℃保存，15 天內多次使用的話置于 4℃保存即可。

2. 試劑拆封后請盡快用完。

需自備試劑及設備

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、1×PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套 、細胞篩

使用方法（僅供參考）：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，用普通 1ml 玻璃勻漿器勻漿也可，但是

高爾基體回收率可能會下降。

二、細胞高爾基體提取：

1. 取 1-2×10⁷個細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。

注：貼壁培養(yǎng)細胞用yi酶消化下來或者用刮刀刮取均可。

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

注：用 1000×g 力離心 5 分鐘。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A 重懸細胞，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿幾分鐘。

注：先用 Doumce 勻漿器的松型槌初步勻漿 20-30 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

每上下一個來回為一次。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

7. 將上清在 4℃，3000×g 條件下離心 10 分鐘。

8. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

9. 將上清在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

10. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

11. 在上清中加入 10μl 試劑 WT。

12. 在 4℃，20000×g 條件下離心 20 分鐘。棄上清，留沉淀。

注：沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

13. 在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，輕輕混勻。

14. 在 4℃，20000×g 條件下離心 30 分鐘。

15. 棄上清，沉淀用高爾基體保存液重懸。

注：也可不用試劑盒中的高爾基體保存液重懸。

根據(jù)實驗需要選擇合適的緩沖液重懸高爾基體或直接用于下游實驗。

沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

16. 即得到高爾基體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

三、組織高爾基體提取：

1. 取 50 mg -100 mg 新鮮動物組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用手shu剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

注：用 1000×g 力離心 5 分鐘。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿幾分鐘。

注：先用 Doumce 勻漿器的松型槌初步勻漿 20-30 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

每上下一個來回為一次。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

7. 將上清在 4℃，3000×g 條件下離心 10 分鐘。

8. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

9. 將上清在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

10. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

11. 在上清中加入 10μl 試劑 WT。

12. 在 4℃，20000×g 條件下離心 20 分鐘。棄上清，留沉淀。

注：沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

13. 在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，輕輕混勻。

14. 在 4℃，20000×g 條件下離心 30 分鐘。

15. 棄上清，沉淀用高爾基體保存液重懸。

注：也可不用試劑盒中的高爾基體保存液重懸。

根據(jù)實驗需要選擇合適的緩沖液重懸高爾基體或直接用于下游實驗。

沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

16. 即得到高爾基體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

高爾基體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P4934  高爾基體提取試劑盒  50T/100T