諾博萊德 OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品貨號(hào)：C1508

產(chǎn)品名稱(chēng)：OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

英文名稱(chēng)：OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

外觀(性狀)：干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)

儲(chǔ)存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderC1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell W3110(DE3)來(lái)源于K-12菌株，細(xì)菌的染色體DNA上整合了T7 RNA聚合酶(T7RNP)表達(dá)框原件，T7RNP位于lacUV5啟動(dòng)子下，可表達(dá)T7 RNA聚合酶。pET、pGEX、pMAL等原核表達(dá)載體可使用該菌株進(jìn)行外源重組蛋白的表達(dá)。W3110(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于1×106 cfu/μg DNA。

操作步驟：  

1. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟

1) 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入目的質(zhì)粒到細(xì)胞中，用手指bo打管底，輕輕混勻；

2) 冰水浴中放置30分鐘，不要晃動(dòng)；

3) 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動(dòng)；

4) 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動(dòng)；

5) 加入500μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基；

6) 置于37℃搖床中，150-200rpm震蕩復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘；

7) 取50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

（平板劃線(xiàn)分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm離心30秒鐘，棄掉上清，留100μl左右的液體，用200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μl重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來(lái)回劃線(xiàn)。這個(gè)方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟2的時(shí)間縮短到5分鐘，對(duì)于氨芐青mei素抗性的質(zhì)粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線(xiàn)于含氨芐青mei素抗性的LB平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需60分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng)。）

2. 蛋白表達(dá)步驟

1) 挑取單菌落，接種到含5ml帶抗生素的LB培養(yǎng)基中；

2) 37℃，200rpm震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600=0.4-0.8）；

3) 加入IPTG到終濃度為0.4mM，37℃誘導(dǎo)2-4小時(shí)或16℃誘導(dǎo)過(guò)夜；

4) 誘導(dǎo)完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋白、上清和沉淀組分，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）；

5) 大量表達(dá)時(shí)，可用10ml過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到1L培養(yǎng)基中，當(dāng)培養(yǎng)到OD600=0.4-0.8時(shí)，加入終濃度為0.4mM的IPTG，37℃誘導(dǎo)2-4小時(shí)或16℃誘導(dǎo)過(guò)夜（不同蛋白表達(dá)的優(yōu)良條件有所不同，需在實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化）。

注意事項(xiàng)：

1. 我司生產(chǎn)的生化試劑如無(wú)特殊標(biāo)注，基本為非無(wú)菌包裝，若用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)?zhí)崆白龊妙A(yù)處理。

2. 一旦配成溶液，請(qǐng)分裝保存，避免反復(fù)凍融造成的產(chǎn)品失效。

3. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

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C1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細(xì)胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell  20*100ul