諾博萊德 酵母核蛋白提取試劑盒

酵母核蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5041

產(chǎn)品名稱：酵母核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：酵母核蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5041 酵母核蛋白提取試劑盒

酵母核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種酵母中提取核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。制備的核蛋白純度高，保持天然活性，絕少交叉污染。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

酵母核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種酵母中提取核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。制備的核蛋白純度高，保持天然活性，絕少交叉污染。

本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3、蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4、如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5、可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6、蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體

狀態(tài)后離心 至管底部再開(kāi)蓋。

二、操作步驟

1. 提取液準(zhǔn)備：

每200ul蛋白提取液D中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

3. 用PBS洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每100ul體積酵母沉淀物中加入200ul酵母核蛋白提取液A，混勻后，在30℃條件下保溫 15分鐘。

5. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集酵母沉淀。

6. 用500ul PBS洗滌酵母一次，離心收集菌體。

7. 酵母沉淀物中加入300-500ul酵母蛋白提取液B，充分混勻。

8. 在37℃或室溫條件下輕微振蕩45-60分鐘。

9. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀，棄上清。

10. 用500ul PBS洗滌沉淀。離心收集沉淀。

11. 沉淀中加入400ul酵母核提取液C，高速渦旋15秒混勻，然后在振蕩器上振蕩15-30分鐘。

12. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，2000×g條件下離心5分鐘，棄上清，留沉淀。

13. 在沉淀中加入200ul冷的核蛋白提取液D，充分混勻。

14. 置振蕩器上振蕩30-40分鐘。

15. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。

16. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到酵母核蛋白。

17. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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