諾博萊德  酵母基因組DNA提qu試劑盒 Yeast Genomic DNA Extraction Kit

酵母基因組DNA提qu試劑盒 質(zhì)粒提取

產(chǎn)品貨號：D9788

產(chǎn)品名稱：酵母基因組DNA提qu試劑盒 Yeast Genomic DNA Extraction Kit

英文名稱：Yeast Genomic DNA Extraction Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：酶附件-20℃，其它試劑RT，復檢期1年

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

 NobleRyderD9788  酵母基因組DNA提qu試劑盒本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng)，提取酵母基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司te有新型材料，能夠高效專一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、 PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

操作步驟：

1. 取酵母細胞（不超過5×107cells），8000rpm離心1min，盡量吸除上清。

注意：過夜培養(yǎng)酵母菌液OD值為2.0左右，離心收集菌體，用PBS洗滌盡量去除培養(yǎng)基。

2. 酵母細胞壁的破除：向酵母菌體中加入470μL山li醇Buffer。充分懸浮菌體，加入25μL酵母破壁酶和5μL巰基還原劑，充分混勻。30℃處理1-2h，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3. 12000rpm 離心1min，棄上清，收集沉淀。

4. 向沉淀中加入300μL溶液A，充分懸浮沉淀，向懸浮液中加入2μLRNaseA，充分顛倒混勻，室溫放置10min。

5. 加入220μL溶液B，再加入20μL的蛋bai酶K，充分顛倒混勻，65℃水浴消化15-30min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

6. 8000rpm 離心30s，取上清。（盡快吸出，溫度降至室溫后會出現(xiàn)白色渾濁液體）

7. 冷卻至室溫，加入375μL無水乙醇，混勻后，將液體加入吸附柱中，8000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

9. 向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

10. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)實驗如酶切、PCR等。

11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。

12. 離心所得脫液再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

注意事項：

1.樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA片段較小且提取量下降。

 2.若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。

 3.如果實驗中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當延長離心時間。

 4.洗脫緩沖液的體積最好不少于50μL，體積過小會影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物保存在-20℃，以防DNA降解。

酵母基因組DNA提qu試劑盒 質(zhì)粒提取

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D9788  酵母基因組DNA提qu試劑盒 Yeast Genomic DNA Extraction Kit  50T/100T